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体外血脑屏障（BBB）模型是研究药物或分子穿过BBB能力的重要工具。本文以hCMEC/D3细胞（人脑微血管内皮细胞）和U251细胞（人胶质瘤细胞）共培养为例，介绍构建体外BBB通透性实验的关键步骤，重点突出U251细胞的培养及其在模型中的作用。
首先，将U251细胞接种于Transwell下室，使用DMEM培养基（含10% FBS和1% PS）在37℃、5% CO₂条件下培养。U251细胞模拟星形胶质细胞的功能，为BBB模型提供支持作用，增强屏障的紧密性和功能性。接种后，Transwell倒置培养5-6小时，使U251细胞附着，随后恢复正置继续培养。
第二天，将hCMEC/D3细胞密度接种于Transwell上室，使用1640培养基（含10% FBS和1% PS）培养。每天更换培养基（上室200 μL，下室600 μL），共培养6-7天，形成紧密的单层屏障。实验前，Transwell膜需用鼠尾胶原蛋白和纤连蛋白包被，以促进细胞附着。
实验时，在Transwell上室加入含测试样品（如肽、抗体或纳米颗粒）的培养基，下室加入完全培养基。孵育后，于特定时间点（如2小时、4小时）收集下室液体。使用荧光标记物（如FITC-Dextran）作为对照，通过荧光分光光度计检测样品浓度，计算转胞效率（TE）。
通透性计算公式为：
通透性 (%) = (基底侧浓度 × 基底侧体积) / (样品侧浓度× 样品侧体积) × 100%。
该实验通过模拟BBB的复杂微环境，评估药物或分子穿过BBB的能力，为中枢神经系统（CNS）药物开发提供重要依据。U251细胞在模型中模拟星形胶质细胞的支持作用，显著增强了BBB的紧密性和功能性，使模型更接近体内BBB的特性。hCMEC/D3和U251双细胞共培养模型适用于高通量筛选、大分子药物渗透性研究及BBB转运机制探索。
北京爱思益普生物科技股份有限公司拥有完整的服务链，从转铁蛋白受体的优化选择到CNS-PK 动物技术一系列平台。
体外BBB模型中的通透性（转胞吞作用）检测平台：
我们用hCMEC/D3， bEnd.3 和U251构建了一系列的体外血脑屏障模型用于检测抗体透过血脑屏障的通透性。
Transwell-BBB模型列表
Ø hCMEC/D3和bEnd.3单细胞模型
Ø hCMEC/D3和U251细胞的共培养模型
Ø bEnd.3和U251细胞的共培养模型
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