凋亡,或称程序性细胞死亡,是维持细胞稳态和预防癌症等疾病发展的重要过程。理解和测量凋亡对于癌症生物学、药物开发和毒理学等多个研究领域至关重要。细胞凋亡测定服务提供了精确可靠的方法来通过两种关键途径检测凋亡:Annexin V染色和Caspase 3/7测定。
Annexin V染色是检测细胞凋亡早期阶段最广泛使用的方法之一。这种测定法利用的是磷脂酰丝氨酸(PS)从细胞膜内层转移到外层的过程,这是细胞凋亡的一个早期标志。
工作原理:
原理:在健康的细胞中,磷脂酰丝氨酸(PS)位于细胞膜的细胞质侧。在早期凋亡过程中,PS翻转到细胞膜的外表面,在那里它变得可以被Annexin V识别,Annexin V是一种对PS具有高亲和力的蛋白质。使用流式细胞仪可以检测到Annexin V与PS的结合,从而识别凋亡细胞。
双重染色:为了区分凋亡细胞和坏死细胞,通常会将丙啶碘化物(PI)与Annexin V一起使用。PI只能穿透膜受损的细胞,这些细胞通常处于晚期凋亡或坏死状态。因此,Annexin V阳性/PI阴性的细胞是早期凋亡细胞,而Annexin V阳性/PI阳性的细胞则可能是晚期凋亡或坏死细胞。
Caspase 3/7活性测定专注于检测凋亡过程中的关键执行酶——caspase-3和caspase-7的活性。Caspase酶负责切割多种底物,从而导致细胞组分的系统性分解,包括DNA片段化和核浓缩。
工作原理:
原理:在凋亡启动时,caspase-3和caspase-7被激活并切割特定的底物。Caspase 3/7活性测定使用一种由这些活跃的caspase酶切割的发光或荧光底物,释放出与细胞群体中发生的凋亡量成比例的可检测信号。
执行阶段检测:与检测早期凋亡的Annexin V不同,Caspase 3/7活性测定更专注于凋亡的执行阶段,提供了对凋亡过程后期阶段的检测。