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坐骨神经模型|动物模型构建|坐骨神经慢性缩窄性损伤(CCI)模型

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CCI模型是用铬制羊肠线环扎坐骨神经干制作而成,羊肠线遇水膨胀,对神经形成慢性束缚性损伤,导致部分神经纤维变性坏死;另一方面CCI模型引起的疼痛还与此种可吸收线分解产物引起的炎性刺激有关,因此CCI模型引起的疼痛受两方面因素的影响,作用机制较为复杂。

建模方法:

1.手术器械消毒,结扎线消毒;

2.大鼠麻醉后,一侧后肢剃毛,消毒;

3.剪刀沿坐骨剪开一个1cm左右的开口,分离筋膜;钝性分离肌肉,使坐骨神经主干暴露于视野;

4.用玻璃分针挑出坐骨神经主干,玻璃分针辅助穿线,对坐骨神经进行4道结扎,间隔1mm,力度以结扎第一道时动物脚趾轻微抖动为宜;

5.结扎后对皮肤进行缝合,消毒。

检测方法和结果:

机械痛测定方法(Ascending测试法)

1.将试验动物放置在机械痛金属网架上静置30 min-1 h,待动物不再张望、探究、较安静后开始测试;

2.试验动物安静后用Von-Frey纤维丝缓慢轻柔的刺激待测后肢足底使纤维丝弯曲,持续2-3s观察动物缩足反应。按照纤维丝克数从小到大的顺序逐一刺激受试动物,每一个克数的纤维丝连续刺激5次,每次刺激间隔至少10s。若出现的阳性反应小于3次,则使用较大一级的纤维丝重复上述操作,当测试第一次出现3次或3次以上的阳性反应,则该纤维丝为该动物的疼痛阈值(每只动物测2次测试,取其平均值)。

3.动物若由于刺激而出现抬足、躲避或舔足动作反应,则标记为阳性(×),由于身体活动而引起的缩足反应则不算在内;若没有上述表现,则标记为阴性(О)。

4.纤维丝克数:Mouse(g): 0.16、0.40、0.60、1.0、1.4、2.0切断值为2.0g;Rat(g): 0.60、1.0、1.4、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0、15.0切断值为15.0g。

热板法:

1.将试验动物放置在测试室适应15-30min;

2.仪器准备:将热板温度调定52.5℃(用于大鼠,小鼠55℃);

3.将动物放到热板上观察该动物,直到它表现出伤害性反应,例如舔爪子、跺脚、跳跃和逃离热板(每只测试两次,间隔至少10min);

4.将动物从热板中取出,记录其反应的时间。对于在截止时间之前没有反应的动物,记录截止时间(30s);

5.筛选出痛阈为10-30秒的实验动物。

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