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来源：2025-01-07 13:19:07
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渗透性分析是体外ADMET分析的一个组成部分，药物的渗透性是其肠道吸收和口服生物利用度的重要决定因素。利用Caco-2细胞模型的渗透性测定是最广泛使用的方法之一，因为它们在形态和功能上与人类肠道相似。并且预测的渗透性和体内人体吸收之间的良好相关性已经得到证实。
Caco-2顶膜表面形成的微绒毛形态与胃肠道上皮的小肠绒毛相似，且顶膜表面表达了众多细胞膜转运体，例如P-糖蛋白（Pgp）、乳腺癌耐药蛋白（BCRP）和多药耐药蛋白2（MRP2）。药物可以通过细胞间的细胞旁途径(1)被动扩散、(2)跨细胞膜的跨细胞转运、(3)通过主动载体介导的(受体)摄取和(4)胞转机制被吸收。(5)顶端定位的外排泵，如P-gp，BCRP和MRP（图1）。
Caco-2双向渗透实验简化步骤
1.Caco-2细胞接种于transwell板里的半透膜上经过21-29天的培养后细胞生长分化为完整的细胞单层，通过TEER测定达到230 Ω.cm2后，可以进行药物的渗透试验。
2.用HBSS缓冲液将化合物稀释至1-10μM化合物工作液中。分别将化合物加入顶膜侧或基底侧，孵育2h后取上清，用LC/MSMS测试并计算A-B和B-A的表观渗透速率（Papp），可以评估药物分子的渗透潜力，并用Papp B-A/Papp A-B的比率计算外排率（efflux ratio）以评估化合物是否为外排转运体的底物。
3.Caco-2渗透性范围：
Papp<1*10-6cm/s：低渗透性
1*10-6
Papp>10*10-6cm/s：高渗透性
Efflux ratio> 2：潜在的外排转运体底物
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