爱思益普细胞和分子生物学团队介绍：

爱思益普，拥有人数100+、10年以上丰富经验的细胞学团队。可以提供包括小分子，PROTAC，ADC，抗体药在内的各类药物的检测筛选服务，擅长做各类方法开发及机制探索，合作方式及检测手段灵活多样，紧跟药物研发前沿动态，为客户提供专业高效的各类服务。

前言：

提起HiBiT，想必很多从事生物学研究的人都熟悉，即使不知道它是什么，也一定听说过，因为，这个小家伙真的是生物学研究领域的一个明星，因为，它的出生到现在，一路开挂，更在2017年，荣获过 The Scientist 杂志评选出的 2017 年度十大创新产品。那说到这里，您是否想了解一下，这个家伙到底是一个什么东东呢？

当一个新的产品问世，因为陌生，因为名字古怪，有可能不被关注，为了让更多的人了解这个叫做“HiBiT”的家伙，我必须从源头说起，我想让更多的人了解它，并深深的爱上它。

荧光素酶，想必学过生物的人一定知道吧，这玩意在很久很久以前就活跃在生物圈了，因为，作为报告基因标签，这家伙也曾经为科研界做出过很大的贡献，而通常最活跃的两种荧光素酶就是萤火虫荧光素酶（Firefly luciferase）和海肾荧光素酶（Renilla luciferase）了。萤火虫荧光素酶（Firefly luciferase）是一种分子量约为61kD的蛋白，在ATP、镁离子和氧气存在的条件下，可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的过程中，会发出波长为560nm左右的生物荧光(bioluminescence)，曾经是体内外检测实验中最常用的荧光素酶。海肾荧光素酶（Renilla luciferase）是一种分子量约为36kD的蛋白，在氧气存在的条件下，可以催化腔肠素(Coelenterazine)氧化成Coelenteramide，反应过程无需ATP和镁离子参与。在Coelenterazine氧化的过程中，会发出波长为480nm左右的生物荧光(bioluminescence)。

磨叽磨叽，太磨叽了，讲HiBiT啰嗦这么多荧光素酶干什么，因为我想告诉大家，这些荧光素酶曾经也风光过，而且，它们是“亲戚”，怎么个辈分呢，如果让我来排的话，我想HiBiT的老爹也应该管那些前辈荧光素酶叫“二大爷”吧。那一切的一切就从“HiBiT”它老爹“Nanoluc”开讲。

1.     Nanoluc

Nano，小，luc，可以看成荧光素酶，所以“小荧光素酶”应该算是荧光素酶家族的旁系小弟弟了，当然，一切的辉煌，就从这里开始。

萤火虫荧光素酶（Fluc），海肾荧光素酶（Rluc），小荧光素酶（Nluc）

那么这个旁系的小弟弟究竟优秀在哪里呢？哎，它小啊，你要知道，这些荧光素酶通常是做蛋白标签的，而标签的大小可以大大的影响蛋白的活性，这是其一。第二，它灵敏啊，是他两个哥哥信号的上百倍。就仅仅这两条，它的两个哥哥甚至可以退出历史的舞台，当然，总有一些人比较念旧，不忍心放弃它们。而Nanoluc的第三个优势更是无与伦比，就是它可以把自身的两个结构域拆分，大的部分叫LgBiT（LargeBiT），小的部分叫SmBiT（SmallBiT），而它们的结合又可以形成有完整功能的小荧光素酶。诶？我猜你一定想到了，对，双分子荧光互补（BIFC），当然，这也是站在了前辈的肩膀上，毕竟这些事情，它的“二大爷们”已经做过了，而现在小一辈的LgBiT和SmBiT可以自豪的说，“二大爷们，您辛苦了，以后的蛋白互作交给我们，我们可以更好的保持蛋白功能的完整性”。而这就是著名的NanoBiT实验。

Nanoluc 156位与157位氨基酸处裂解大小两个亚基

2.     HiBiT

别急，别急，HiBiT终于要上场了，不过还是介绍一下它的大哥们“LgBiTs”，您一定看得懂吧，这些LgBiT中最优秀的，通过层层突变筛选的，功能最稳定的被用来做BIFC，也就是上面说的双分子荧光互补实验，而它的其它哥哥“SmBiTs”中，有一位与LgBiT的结合能力最差，因为结合能力差，用来做BIFC时的背景就特别低，叫SmBiT。而HiBiT就是SmBiTs中的一员，所谓High BiT也，即与LgBiT结合效率最高的那个家伙。

SmBiT与LgBiT的亲和性

鉴于Nanoluc的优势，鉴于HiBIT的标签极小（仅11个氨基酸），使得HiBIT在科研中有着非常重要的应用，尤其在蛋白降解的研究上。

3.     HiBIT应用之内源蛋白降解

a. PROTAC的介绍

很多疾病的产生，从分子生物学的角度来讲都是基因功能改变造成的，而最终体现形状的则是基因的终产物蛋白质，因此，对蛋白质的功能调控是生物制药重要的一环，在方式上，无非三种形式，抑制蛋白活性，促进蛋白功能，把蛋白降解掉。而在三种方式中研究蛋白的降解已经越来越多了。

蛋白降解的研究中，近年来方式方法层出不穷，如LYTAC、PHOTAC、PROTAC、分子胶、AUTAC等，而PROTAC是其中最具有代表性的药物。

PROTAC（proteolysis-targeting chimeras）是一种利用泛素－蛋白酶体系统（Ubiquitin-Proteasome System， UPS）对靶蛋白进行降解的药物开发技术。PROTACs通过将靶蛋白配体与E3连接酶配体连接，将E3连接酶"募集"到靶蛋白附近，并利用细胞内的泛素-蛋白酶体系统，实现靶蛋白的泛素化标记和蛋白降解。靶蛋白一旦被降解，PROTACs分子便游离出来，参与到下一轮的蛋白结合-降解循环中。

PROTAC分子作为药物领域的一大前沿技术，大大缩短了小分子药物的发现与设计周期，而在检验PROTAC分子的效果上，传统的WB检测是最直接的方式，但是这里要考虑的方面很多，比如，（1）是否有合适的靶蛋白抗体。（2）需要大量的细胞处理。（3）周期相对较长不利于高通量筛选。

b. KI-HiBiT的兴起