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前言
Caco-2细胞模型是评估药物吸收和外排底物鉴定的重要工具。本文实验比较了在双向渗透实验中添加和不添加牛血清白蛋白（BSA）时的渗透性差异，以更好地理解BSA对低质量平衡化合物的作用机制。
Transwell 模型：
Caco-2细胞单层在tranwell板中培养21-25天，然后通过检测跨上皮电阻（TEER）确认模型的完整性。双向渗透试验的A-B渗透系数检测：向细胞单层的顶侧（AP）加入化合物工作液溶液，基底侧（BL）加入含4% BSA和不含BSA的空白buffer溶液。BL到AP方向则向基底侧（BL）化合物工作液溶液，顶侧（AP）加入含4% BSA和不含BSA的化合物工作液溶液。每组实验均在37 °C、5% CO₂和90%湿度下孵育2小时后收集样本。
在添加和不添加BSA的情况下，通过对比化合物的渗透系数Papp来判断添加BSA对渗透，外排率和回收率的影响。尽管如此，对于外排底物鉴定的可靠性，两种处理结果差异较小甚至会低估外排率，这表明即使在不使用BSA的情况下，仍可合理推测外排转运体的活性。
从经验上来看，BSA的使用可以对某些化合物可以提高回收率，从而提高渗透性测量的准确性。但是并不是所有化合物都适用，要考虑化合物稳定性稳定，以及是否是碱性化合物被细胞的溶酶体滞留等情况。
在药物发现阶段，推荐在Caco-2实验接受侧添加BSA以改善渗透性检测精度。然而，对于外排底物的鉴定，即使不添加BSA，实验结果仍具备合理的可靠性，为更灵活的实验设计提供了可能性。
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